摘要 目的
评估干扰素α(IFN-α)和TT-1(一种蜂毒肽的 类似物)联合用药的抗肿瘤效果,并初步研究联 合用药的抗肿瘤及免疫调节机制。
创新点
为了增强蜂毒肽的抗肿瘤效果,本课题组在其基 础上进行改造,合成了一种新的化合物TT-1。该 研究第一次将蜂毒肽类似物和免疫细胞因子 IFN-α 联合使用,并通过实验证实联合用药可以 通过激活免疫调节来增强TT-1 的抗肿瘤效果。
方法
首先通过MTT 实验验证TT-1 对HepG-2/Huh7 细 胞的增殖抑制作用。接着建立HepG-2/Huh7 小鼠 移植瘤模型,考察TT-1+IFN-α 的体内抗肿瘤效 果;使用anti-asialo GM-1 抗体消除自然杀伤 (NK)细胞,验证NK 细胞在联合用药中的关键 作用。使用流式细胞术和酶联免疫吸附法 (ELISA)验证TT-1 对HepG-2/Huh7 细胞MHC I 链相关分子A(MICA)表达的影响,并用实时 聚合酶联反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)对其机制进行探究;通过细胞毒性实验考察TT-1+IFN-α 是否可以增强NK细胞对HepG-2/ Huh7 细胞的特异性杀伤作用。最后使用免疫组 化的方法考察TT-1+IFN-α 联合用药对肿瘤组织 中MICA 和NKG2D 的表达量的影响。
结论
MTT 实验表明TT-1 可以在体外有效地抑制 HepG-2/Huh7 细胞的增殖。小鼠移植瘤模型实验 结果显示TT-1+IFN-α 联合用药比TT-1 单独给药 更能有效地抑制HepG-2/Huh7 移植瘤的生长,但 是在消除NK 细胞之后该效应明显减弱,说明 TT-1+IFN-α 的抗肿瘤效应是通过NK细胞特异性 介导的。TT-1 不仅可以上调肿瘤细胞表面MICA 的表达量,而且可以减少可溶性MICA 的分泌; 进一步研究表明,TT-1 通过抑制去整合素金属蛋 白酶10(ADAM 10)的表达来阻止MICA 从肿 瘤细胞表面脱落。细胞毒性实验表明,TT-1+IFN-α 可以显著增强NK细胞对HepG-2/Huh7 细胞的杀 伤作用。免疫组化实验结果显示,TT-1+IFN-α 联 合用药可以明显增加肿瘤组织中肿瘤细胞表面 MICA 和NK 细胞NKG2D 的表达量。综上所述, TT-1+IFN-α 联合用药可以通过增强MICA 和 NKG2D 的相互作用达到显著的抗肿瘤效果。