中文概要 目 的
探究新发现的两个miRNA 对家蚕丝素轻链基因BmFib-L 的调控作用。
创新点
在家蚕后部丝腺中发现两个新的miRNA, 并首次证明它们对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L 有负调控作用。
方 法
本实验通过生物信息学分析, 从家蚕后部丝腺 miRNA 高通量测序获得的新miRNA 中, 筛选出 两个可能对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L 有 调控作用的miRNA, 即bmo-miR-0001 和bmomiR-0015。设计茎环引物, 采用反转录聚合酶链 反应(RT-PCR)方法对家蚕5 龄3 d 头部、表皮、 脂肪体、马氏管、精巢/卵巢、丝腺(前、中、 后)、气管、中肠和血淋巴细胞等12 个不同组 织的bmo-miR-0001 和bmo-miR-00015 进行半定 量表达分析。并采用双荧光报告基因检测系统进 一步在细胞水平上验证bmo-miR-0001 和 bmo-miR-0015 对BmFib-L 表达的调控作用。
结 论
本实验中RT-PCR 结果显示, 这两个新miRNA 在家蚕后部丝腺中表达量最高(图4)。双荧光 报告基因检测结果显示, 报告基因荧光素酶活性 明显低于阳性对照组(图7), 转染bmo-miR-0001 和bmo-miR-0015 表达载体的细胞, 报告基因和 荧光素酶活性分别只及对照组60%和69%。t 检 验分析结果显示两个实验组与对照组之间差异 都达到显著水平(P<0.05) 。由此可见, bmo-miR-0001 和bmo-miR-0015 在体外对 BmFib-L 的表达具有显著的抑制作用。