采用 T-RFLP 和 PCR-DGGE方 法评价处理乳和非处理乳在冷藏过程中细菌多样性
摘要 采用恰当,可靠的方法评价处理过程对乳微生物动力学的影响,对更好地控制乳微生物质量是非常重要。本研究比较了处理乳与非处理乳在冷藏条件下 (4 °C 或 8 °C下 7 天) 微生物的多样性及其变化。分别采用充二氧化碳, 热杀菌 (TH) 和微过滤 (MF) 方法对原料乳进行处理。两种分子指纹图谱方法, 即末端限制片段长度多态性 (Terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP) 和变性梯度凝胶电泳 (Denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE) 用于本研究中。根据 T-RFLP 和 PCR-DGGE 的图谱, 推测乳中主要微生物为耐寒性微生物 Streptococcus, Staphylococcus, Pseudomonas 和 Aerococcus 属。冷藏 7 天后, 在 UT 和 CO2 处理的乳样中, 以 Pseudomonas spp., Trichococcus floculiformis, Prevotella spp. 为主导菌群, TH 处理乳中无上述菌群, 但以 Staphylococcus spp. 为主, MF 处理乳样中则以 Stenotrophomonas spp. 为主导菌群。T-RFLP 的主成分分析揭示了处理方法对特定微生物有强烈的影响。PCR-DGEE 图谱揭示了主导菌群与处理方法 (TH、CO2 和 MF) 对乳样微生物菌群的作用是密切联系, 这种方法可以作为评价处理乳质量的标记。T-RFLP 方法与 PCR-DGGE 方法相比, 就有更高的分辨率, 因此可以作为乳中微生物群落分析的精确工具。