Fetal RHD genotyping from maternal plasma was performed by real-time PCR amplification of exons 7 and 10 of the RHD gene and the amplified products were detected either with SYBR Green I dye according to our previously published method [Mol Diagn 8 (2004) 23–31] or with hydrolysis probes in a new Free DNA Fetal Kit RhD ® . Plasma specimen from 300 RhD-negative pregnant women (between 10 to 34 weeks of gestation) were analysed and validation of the results was ascertained either by RHD genotyping on amniotic cells or by blood typing of the neonate at birth. We found 100% concordant results when comparing the two methods. Two false-positive but no false-negative results were found. Thus, the sensitivity of the assay was 100% and the specificity superior than 99%. These data confirm the accuracy of fetal RHD genotyping on maternal plasma using the Free DNA Fetal Kit RhD ® , thus allowing to propose non invasive PCR-based fetal RHD genotyping for all RhD-negative pregnant women and to restrict the use of anti-D immunoglobulins only to those bearing an RhD-positive fetus.
Le génotypage RHD fœtal à partir du plasma maternel a été effectué par amplification PCR en temps réel des exons 7 et 10 du gène RHD et détection des produits d’amplification soit par incorporation du colorant SYBR Green I selon une méthode publiée auparavant [Mol Diagn 8 (2004) 23–31], soit à l’aide d’une nouvelle trousse diagnostic Free DNA Fetal Kit RhD ® . Une cohorte de 300 femmes de phénotype RhD-négatif enceintes de dix à 34 semaines de gestation a été analysée et les résultats ont été validés soit par génotypage sur des cellules amniotiques, soit par le phénotype Rh de l’enfant à la naissance. Nous avons observé une concordance totale entre les deux méthodes de génotypage. Deux faux-positifs, mais aucun faux-négatif n’ayant été identifiés ; la sensibilité du test est de 100 % et la spécificité supérieure à 99 %. Ces résultats confirment la précision du génotypage RHD fœtal à partir du plasma maternel basé sur la trousse Free DNA Fetal Kit RhD ® . Un génotypage fœtal RHD non invasif peut donc être proposé à toutes les femmes enceintes de phénotype RhD-négatif afin de restreindre l’injection d’Ig anti-D uniquement à celles portant un fœtus RhD-positif.