An intracellular aminopeptidase from Brevibacterium linens ATCC 9174 was purified 4300-fold to homogeneity using ammonium sulphate fractionation, anion exchange chromatography, hydrophobic interaction chromatography and anion exchange chromatography. The pH and temperature optima were 8.5 and 35 °C, respectively. The purified aminopeptidase was stable over the range pH 8 to 10, and was thermally stable up to 20 °C at pH 8.5. The molecular mass of the enzyme was found to be 59 kDa by SDS-PAGE and 69 kDa by gel filtration, indicating that the native enzyme exists as a monomer. The aminopeptidase was strongly inhibited by the thiol blocking agent, p-hydroxymercuribenzoate, and by Co 2 + and Zn 2 + ; activity was unaffected by metal chelators, reducing agents or phenylmethylsulphonyl fluoride. K m and k c a t values for l-Ala-p-NA were 3.3 mmol/L and 4.3 s - 1 , respectively, while the corresponding values for l-Gly-p-NA were 0.2 mmol/L and 7.6 s - 1 , respectively. The aminopeptidase hydrolysed dipeptides with an alanine residue at the N-terminal but tripeptides were not hydrolysed. The sequence of the first 19 N-terminal amino acids was NH 2 -Pro-Phe-Asp-Gly-Pro-Asp-Thr-Ala-Ala-Ile-Ile-Asp-Arg-Leu-?-Asn-Ala-?-Thr .Une aminopeptidase intracellulaire de Brevibacterium linens ATCC 9174 a ete purifiee 4300 fois par homogeneisation et fractionnement au sulphate d'ammonium, chromatographie d'echange d'anions, chromatographie par interactions hydrophobes et chromatographie d'echange d'anions. Le pH et la temperature optimale etaient respectivement de 8,5 et 35 °C. L'aminopeptidase etait stable, de pH 8 a 10. De plus, elle etait stable thermiquement a 20 °C a pH 8,5. La masse moleculaire de l'enzyme, determinee par SDS-PAGE et filtration sur gel etait respectivement de 59 kDa et 69 kDa, ce qui indique que l'enzyme native existe sous forme de monomere. L'activite enzymatique est fortement inhibee par l'agent bloquant les groupements thiols, le p-hydroxymercuribenzoate, et par les ions Co 2 + et Zn 2 + ; l'activite enzymatique n'est pas inhibee par les chelateurs de metal, les agents reducteurs ou le fluorure de phenylmethylsulphonyle. Les valeurs K m et k c a t pour le l-Ala-p-NA etaient respectivement de 3,3 mmol/L et 4,3 s - 1 , tandis que les valeurs correspondantes pour l-Gly-p-NA etaient respectivement 0,2 mmol/L et 7,6 s - 1 . L'aminopeptidase hydrolysait les dipeptides possedant un residu alanine en N-terminal mais les tripeptides n'etaient pas hydrolyses. L'ordre des 19 premiers acides amines N-terminaux etait NH 2 -Pro-Phe-Asp-Gly-Pro-Asp-Thr-Ala-Ala-Ile-Ile-Asp-Arg-Leu-?-Asn-Ala-?-Thr .