A genomic library from Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris (Lmc) in Escherichia coli was screened for α-acetolactate synthase (ALS) activity using a phenotypic test detecting the production of acetolactate or related C 4 derivatives (diacetyl, acetoin or 2,3-butanediol) in the culture. Four recombinant E. coli clones, with plasmids containing overlapping DNA fragments and displaying anabolic ALS activity, were selected. This activity is encoded by an ilvB gene belonging to a putative operon which contains genes highly similar to the genes of the branched chain amino acid (BCAA) operon of Lactococcus lactis subsp. lactis. This putative BCAA operon is not functional as the ilvA gene is interrupted by a single mutation and the strain is auxotrophic for the three BCAAs. Only a very low anabolic ALS activity was present in cell-free extracts of Lmc and no transcript from the ilvB gene could be detected. Instability of ilvB expression in E. coli wasthe consequence of a frequent IS5 insertion sequence in this gene. Despite the detection of a high catabolicALS activity in Lmc, no catabolic ALS activity gene could be found in the BCAA gene locus, indicating the presence of a catabolic als gene in the Lmc chromosome that could be absent or not expressed in the screened library.
Clonage de gènes de synthèse des acides aminés branchés et caractérisation d'activités α-acétolactate synthase chez Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris. Une banque génomique de Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris (Lmc) chez Escherichia coli a été criblée pour l'activité α-acétolactate synthase (ALS) à l'aide d'un test phénotypique mettant en évidence la production, dans le milieu de croissance, d'α-acétolactate ou de ses dérivés métaboliques en C 4 (diacétyle, acétoïne, ou 2,3-butanediol). Quatre clones recombinants de E. coli avec des plasmides contenant des inserts chevauchants ont été sélectionnés et caractérisés comme présentant une activité ALS uniquement du type anabolique. Cette activité est codée par un gène du type ilvB appartenant à un opéron putatif dont les gènes présentent d'importantes homologies avec les gènes de l'opéron de synthèse des acides aminés branchés (AAB) de Lactoccocus lactis subsp. lactis. L'instabilité de l'expression de ce gène ilvB de Lmc chez E. coli a pu être attribuée à sa fréquente interruption par une séquence d'insertion de E. coli du type IS5. Cet opéron putatif est non fonctionnel car le gène ilvA est interrompu par une mutation. La souche de Lmc est auxotrophe pour les trois AAB et ne présente qu'une très faible activité ALS du type anabolique. Aucun gène codant pour une activité ALS du type catabolique n'a été détecté dans les inserts des plasmides des clones recombinants de E. coli. La présence d'une forte activité ALS du type catabolique chez Lmc indique donc qu'un gène correspondant, probablement absent ou non fonctionnel dans la banque génomique criblée, se trouve sur le chromosome en dehors du locus de cet opéron putatif.